RNA干扰慢菌株稳定株筛选

2022-01-31 01:30:17 来源:
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小分子RNA依赖性核心技术是一种特异性地受阻某些调控的数据分析策略,在、大肠杆菌感染者,遗传病及其它营养不良的治疗中所均有广泛应用。很慢大肠杆菌核酸是一类来源于重三组逆转录大肠杆菌的核酸,由于具有可以感染者非瓦解期与瓦解期线粒体,现有大的外源性借此 基因序列片段,免疫小等特点,如今视为分散借此 基因序列进入哺乳动物线粒体的完美核酸。将很慢大肠杆菌核酸广泛应用RNA依赖性当中所,可以特异性减缓哺乳动物的各类线粒体中所基因序列的传达,视为基因序列功能数据分析和基因序列治疗的有力策略。现今数据分析断定很慢大肠杆菌核酸能在哺乳动物各类线粒体牢固传达siRNA,长时间减缓调控。为创建线粒体模型后续基因序列治疗缺少直接的数据分析策略。

生博现今为客户择优过几百种基因序列的依赖性早先,并通过很慢大肠杆菌得到几十种牢固线粒体株。为后续数据分析基因序列治疗缺少了直接依据。

BXXX1基因序列依赖性牢固HeLa线粒体株协作

第一外:BXXX1依赖性核酸协作(核酸pMagic 4.1)

siRNA设计:

MarkergeneGene IDTargetSeqGC%KD1BXXX1NM_XXX4 GCCXXXXXXXXXXXXXGA47.4 KD2BXXX1NM_XXX4GGTXXXXXXXXXXXXXTAT52.6KD3BXXX1NM_XXX4CCAXXXXXXXXXXXXXTTT52.6KD4 BXXX1NM_XXX4GCAXXXXXXXXXXXXXGAA47.4pLVT4NC TTCTCCGAACGTGTCACGT 52.6

第二外QPCR筛靶科学研究

Real-time PCR探测结果显示: HeLa线粒体中所,相对来说NC三组, 四个抗大肠杆菌中所,KD2,KD4对借此基因序列BXXX1的传达的掰减成本达致80%以上,KD3对借此基因序列BXXX1的传达的掰减成本也达致50%以上,都是直接抗大肠杆菌。

第三外Western blot内源验证科学研究报告

Western Blot探测结果

探头陈述:

M 为Marker;

1 CON为情况下借此空线粒体(HeLa)探头;

2 NC为情况下借此线粒体(HeLa),加在特征性解读大肠杆菌感染者的线粒体探头(Negative Control);

3 KD为情况下借此线粒体(HeLa),加在RNAi抗大肠杆菌大肠杆菌感染者的线粒体探头(Knock Down)

从Western Blot结果可以显成,KD1,KD2抗大肠杆菌对HeLa线粒体BXXX1的传达有掰减效果,为直接抗大肠杆菌。

第四外:依赖性很慢大肠杆菌KD1.、解读很慢大肠杆菌CMV-GFP-L.V.感染者HeLa线粒体株后择优牢固株。

HeLa 亮三组 White light荧光三组 Fluoresce 稀释度 Day 3, 100× BlankKD1 MOI 10KD1 MOI 20CMV-GFP MOI 10CMV-GFP MOI 20

三、科学研究揭示:

1、HeLa线粒体感染者KD1.很慢大肠杆菌,MOI 10、MOI 20时口服大,死线粒体多。若只计活线粒体,感染者体积小,都少于80%。

2、HeLa线粒体感染者CMV-GFP-L.V.很慢大肠杆菌,MOI 10、MOI 20时感染者体积小,都少于90%。

3、传代培养后,最终择优成HeLa- KD1 MOI 10牢固株,HeLa- KD1 MOI 20牢固株、HeLa- CMV-GFP MOI 20牢固株。

编辑: 陈

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