分子生物工具书之：核苷酸纯化-DNA

▋ DNA 氢化课程内容

人们现在对 DNA 的分析，有时候是通过多重 PCR、real-time PCR 和对稀少事件的数据分析来展开的，因此两者之间比之下氢化 DNA 极为重要。两者之间比之下的分析转化是获得两者之间比之下的河段检测结果的必要条件。我们不必了解 DNA 氢化系统的工作原理，然后针对不足之不远处应用考虑最适合的化学流程。

DNA 氢化常见的考验

● 硫化探针从而释放 DNA● 将 DNA 大分子与钙、核糖、糖类和 RNA 等其他大分子转化● 保持 DNA 大分子的连续性

DNA 来源不尽两者之间同陷入的考验也不尽两者之间同。例如巧克力等药品，其里含有诱导的有机化合物，如果这些有机化合物被已氢化的 DNA 携带，则显然抑制河段的检测。从革兰氏阳性细菌里转化 DNA 需要要高效的硫化细菌厚厚的多糖蛋白壁。一定要必要你适用的 DNA 氢化原理能够彻底解决检验陷入的新问题。

欢乐提示：肾脏和有组织检验在适用前需要冷冻保存，以大大减少核糖酶对 DNA 的受到破坏。在取出一小部分展开 DNA 氢化早先需要将解冻后的肾脏完全融合。

DNA 氢化基本迭代

DNA 氢化：硫化、两者之间辅两者之间成和洗涤

硫化：受到破坏蛋白或有组织-酶不远处理-机械受到破坏-去垢剂不远处理

硫化：使核糖复合或失去活性-原子去垢剂、加热、还原剂、尿素和胍类-核酸（如核酸 K）

硫化：使小大分子核糖酶-苯甲酸（例如 EDTA）-核酸（例如 核酸 K）

两者之间辅两者之间成与洗涤：转化 DNA-消除其他核糖（如 RNA）-消除核糖 •有机提炼 •食盐析 •与固两者之间多种形式两者之间辅两者之间成 -硅酸食盐胶体 -卤化物对等柱 -磁力薄膜

两者之间辅两者之间成与洗涤：从其他蛋白颗粒里转化 DNA 的原理

■ 有机提炼

当苯酚或苯酚: 融合物与蛋白硫化物融合时，显然会成型两两者之间：水两者之间和有机两者之间。亲水性 DNA 大分子进到亲水性两者之间或「水两者之间」，而复合的核糖和其他蛋白碎片则进到有机两者之间。

■ 食盐析

食盐可以让核糖脱水，从而提高其亲水性，然后复合，复合后的核糖丧失溶解性从而沉淀；通过离心法消除沉淀的核糖和蛋白碎片。近似于的食盐包括包括氯化钠、乙酸钾或乙酸铵。

■ 与固两者之间多种形式两者之间辅两者之间成

绝大多数的 DNA 氢化原理主要依据的原理是：通过针对性地与固两者之间多种形式两者之间辅两者之间成, 从而从钝硫化物里氢化 DNA。这类固两者之间多种形式包括硅酸食盐多种形式和卤化物对等混合物。有时候来说，适用固两者之间多种形式氢化 DNA 比其他原理用时更为较长、配置更为便捷，因为不需要要任何四氢呋喃，而且可以微型化和自动化从而实现测序。

与 DNA 两者之间辅两者之间成的固两者之间多种形式类型

硅酸食盐胶体：DNA 显然会在高沸点离液食盐（例如食盐酸胍）存在的情况下与硅酸食盐两者之间辅两者之间成，但是核糖不显然会。可以适用含有乙醇的洗涤液都是食盐，然后在较低原子强度的氯化钠（例如 TE 或水）里洗清 DNA。

卤化物对等柱：氢化的主要原理是 DNA 里带负电荷的磷酸基团与对等柱上带正电荷的大分子之间两者之间互作用。在较低食盐条件下，DNA 与多种形式两者之间辅两者之间成，而核糖和 RNA（衡量所用的缓冲液）则被洗涤都是。DNA 可以用高食盐缓冲液洗清。

在薄膜表面展开的 DNA 磁力转化：许多其产品试剂盒的工作原理是适用磁力薄膜从氯化钠里捉到 DNA。磁力薄膜可以由硅酸食盐等材料制成，DNA 的两者之间辅两者之间成和洗清衡量食盐沸点或 pH。

DNA 、沸点和连续性

正因如此的、完整的 DNA 对于许多河段校准至关重要。近似于评估 DNA 的近似于原理是在 260nm 的无线电波不远处（DNA 在该无线电波下有最大能吸收崖）校准检验吸光度。通过校准 280nm 无线电波不远处的吸光度，并且测算 260nm 与 280nm 不远处的吸光度之比，可以检测出氢化流程里显然适用到的或残留在检验里的其他有机有机化合物。荧光染料和 qPCR 是测算 DNA 沸点并确切类产品连续性的替代原理，主要在本须知不足之不远处关于核糖定量篇章展开详细讨论。

照片来源：普洛麦格